藥品研發(fā)中長期留樣進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的和意義

*，穩(wěn)定性試驗(yàn)包括影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長期留樣試驗(yàn)。影響因素試驗(yàn)的目的是明確藥品可能的降解途徑、初步確定藥品的包裝、貯藏條件和加速試驗(yàn)的條件，同時(shí)驗(yàn)證處方的合理性和分析方法的可行性；加速試驗(yàn)的目的是明確藥品在偏離正常貯藏條件下的降解情況、確定長期留樣試驗(yàn)的條件；長期穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的是確認(rèn)影響因素試驗(yàn)和加速試驗(yàn)的結(jié)果，明確藥品穩(wěn)定性的變化情況，確定藥品的有效期；應(yīng)該說長期留樣試驗(yàn)是穩(wěn)定性試驗(yàn)的核心。

但是，藥物研發(fā)是一個(gè)系統(tǒng)工程，從研究、開發(fā)到生產(chǎn)上市，要經(jīng)歷許多個(gè)階段，包括基礎(chǔ)研究、模型的建立與開發(fā)、臨床前研究、臨床試驗(yàn)，以及注冊審批與生產(chǎn)上市等階段，藥學(xué)研究則要經(jīng)歷由小試、中試到大生產(chǎn)逐級放大的過程，如何認(rèn)識不同研發(fā)階段不同規(guī)模樣品進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的和意義，以及不同規(guī)模樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果對確定或推算產(chǎn)品有效期的價(jià)值，是藥品研發(fā)者和評價(jià)者應(yīng)思考的問題。另外，穩(wěn)定性試驗(yàn)的考察指標(biāo)主要包括外觀性狀、理化性質(zhì)、化學(xué)性質(zhì)和微生物性質(zhì)等方面，那么，這些考察指標(biāo)變化到什么程度仍被認(rèn)為是穩(wěn)定的，這個(gè)限度是確定藥品有效期的關(guān)鍵。下面就不同規(guī)模樣品進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的和意義；如何判斷藥品的外觀性狀、理化性質(zhì)、化學(xué)性質(zhì)和微生物性質(zhì)是否發(fā)生變化；如何確定或推算藥品的有效期；以及確定藥品的有效期時(shí)需注意的問題等方面談一談自己的看法，與業(yè)內(nèi)人士共同交流和探討。

1 不同規(guī)模樣品進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的和意義

在藥物研發(fā)的早期階段，藥學(xué)研究還在進(jìn)行不同處方劑型的比較研究，無法提供不同批次，不同生產(chǎn)規(guī)模樣品的完整的穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)。小試樣品應(yīng)進(jìn)行影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長期留樣的穩(wěn)定性試驗(yàn)。影響因素試驗(yàn)考察一批樣品，時(shí)間是10天；加速和長期留樣試驗(yàn)樣品的批次和時(shí)間不作硬性規(guī)定，重點(diǎn)關(guān)注加速試驗(yàn)的結(jié)果，以及與長期留樣試驗(yàn)結(jié)果的比較，穩(wěn)定性研究結(jié)果應(yīng)能確保樣品在相應(yīng)研發(fā)期間質(zhì)量的穩(wěn)定性。

隨著藥品研發(fā)的進(jìn)程，研究用樣品的需要量不斷增大，處方工藝基本確定，工藝在不斷地放大，研究者需對工藝放大的樣品進(jìn)行相應(yīng)的藥學(xué)研究，包括穩(wěn)定性研究。此時(shí)，應(yīng)對三批擬上市包裝中試或中試以上規(guī)模的樣品進(jìn)行加速試驗(yàn)和長期留樣試驗(yàn)，時(shí)間應(yīng)能保證相應(yīng)研發(fā)期間樣品的質(zhì)量符合要求。

藥品申請注冊時(shí)，應(yīng)提供三批擬上市包裝中試或中試以上規(guī)模樣品加速試驗(yàn)和長期留樣試驗(yàn)資料，加速試驗(yàn)6個(gè)月，長期試驗(yàn)至少12個(gè)月，其結(jié)果為確定藥品的包裝、貯藏條件和藥品的初步有效期提供。

藥品上市后，繼續(xù)對生產(chǎn)規(guī)模的樣品進(jìn)行長期留樣的穩(wěn)定性試驗(yàn)，以確定產(chǎn)品的實(shí)際有效期。

2 外觀性狀變化的判斷

我們經(jīng)常碰到的情況是外觀性狀發(fā)生了變化，但主藥含量和/或降解產(chǎn)物沒有變化，這表明藥品中的有效成分沒有損失，如果該變化在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中外觀性狀規(guī)定的范圍內(nèi)，且不影響產(chǎn)品的質(zhì)量和療效，則應(yīng)在標(biāo)簽中注明：“在存儲過程中藥品可能會發(fā)生一些外觀的變化，但這些變化不會影響產(chǎn)品的質(zhì)量和療效”。

如果產(chǎn)品的外觀性狀發(fā)生了變化，且超出了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中外觀性狀規(guī)定的限度，例如：顏色由微黃色變?yōu)辄S色，顏色的上限就是黃色，而且可以被確定（盡可能使用比色圖），則應(yīng)判斷藥品失效。

也就是說，判斷藥品外觀性狀是否發(fā)生變化，主要依據(jù)藥品的質(zhì)量是否發(fā)生變化，以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中外觀性狀的描述和規(guī)定的范圍。

3 理化性質(zhì)變化的判斷

這里所說的理化性質(zhì)是指藥品的物理化學(xué)性質(zhì)，通常包括理化常數(shù)、酸堿度（pH值）、脆碎度、崩解時(shí)限、融變時(shí)限等。

迄今為止，還沒有找到反應(yīng)動力學(xué)與理化性質(zhì)的數(shù)學(xué)關(guān)系，故用反應(yīng)動力學(xué)推算藥品理化性質(zhì)的變化是不可能的。目前認(rèn)為，在加速試驗(yàn)中沒有變化的測試項(xiàng)目，在長期留樣條件下也不會發(fā)生變化。

另外，為理化性質(zhì)變化確定限度也是一項(xiàng)非常困難的工作，尤其是我們不清楚這些理化性質(zhì)的變化對藥物的生物利用度是否有影響。

綜上，判斷理化性質(zhì)是否發(fā)生變化主要依據(jù)藥品的質(zhì)量是否發(fā)生變化，以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的限度和藥典通則的相關(guān)規(guī)定。

4 化學(xué)性質(zhì)變化的判斷

在大多數(shù)情況下，主藥含量可以根據(jù)加速試驗(yàn)的結(jié)果用反應(yīng)動力學(xué)的方法推算出來，將主藥含量限度定為在整個(gè)有效期內(nèi)不低于標(biāo)示量的90%目前也被普遍接受，當(dāng)然，10%的含量變動范圍僅僅適用于主藥降解產(chǎn)物的安全性可以接受的情況。

反應(yīng)動力學(xué)是推算藥品有效期的有力工具。不管進(jìn)行推算的數(shù)據(jù)來自加速試驗(yàn)還是長期留樣試驗(yàn)，都必須根據(jù)C＝f（t）的圖表確定樣品的反應(yīng)動力學(xué)類型（零級，一級，二級……）；然后，根據(jù)不同氣候區(qū)溫度（21℃、31℃和41℃，某些情況下4℃）推算主藥的含量，在由此得出的主藥含量變化的曲線圖上，沿平行X軸方向在主藥含量90%處作一條直線，曲線和直線的交叉處即是不同氣候區(qū)藥品的推算有效期。

如果在溫度和主藥含量間沒有找到相應(yīng)的數(shù)學(xué)關(guān)系，或者藥品性質(zhì)的改變有時(shí)間依賴性，則只能對穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析確定產(chǎn)品的有效期，而不能推算藥品的有效期。此時(shí)，長期留樣試驗(yàn)的時(shí)間和結(jié)果就是決定產(chǎn)品有效期的*依據(jù)。

5 微生物性質(zhì)變化的判斷

對非無菌制劑，應(yīng)對其中的微生物進(jìn)行控制。對處方中不含防腐劑的產(chǎn)品，判斷微生物性質(zhì)是否發(fā)生變化主要依據(jù)藥典通則的相關(guān)規(guī)定。對處方中含有防腐劑的產(chǎn)品，則應(yīng)控制防腐劑的含量，確保其在產(chǎn)品有效期內(nèi)都能發(fā)揮作用；防腐劑的含量變化不受標(biāo)示量90%的限制。對無菌制劑，應(yīng)進(jìn)行容器密封性挑戰(zhàn)試驗(yàn)，以確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)達(dá)到無菌要求。但是，微生物性質(zhì)不能從1～2批樣品的研究結(jié)果進(jìn)行外推，因?yàn)槲⑸锏挠绊懸蛩睾芏啵喝缁钚猿煞?、輔料、生產(chǎn)環(huán)境和包裝等均可影響產(chǎn)品的微生物性質(zhì)，這一點(diǎn)應(yīng)特別注意。

6 確定藥品有效期時(shí)需注意的問題

6.1 有效期適用于該產(chǎn)品，因此，僅依據(jù)一批產(chǎn)品的穩(wěn)定性就做出結(jié)論是不夠的，至少應(yīng)對三批產(chǎn)品的穩(wěn)定性進(jìn)行研究，而且包括不同規(guī)模樣品的穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

6.2 在進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析時(shí)，應(yīng)對所有可以定量的質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行方差分析，以確定不同批次樣品之間是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，如果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，則可以得出相應(yīng)的結(jié)論。對小試、中試和大生產(chǎn)樣品穩(wěn)定性數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析尤為重要，如果不同規(guī)模樣品的穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，則可以認(rèn)為將來生產(chǎn)時(shí)不同批次產(chǎn)品的穩(wěn)定性沒有差異，因?yàn)橄嗤?guī)模產(chǎn)品的質(zhì)量差異不會大于不同規(guī)模產(chǎn)品的質(zhì)量差異。

6.3 產(chǎn)品穩(wěn)定性的重要信息主要來自確定處方樣品的加速試驗(yàn)，根據(jù)反應(yīng)動力學(xué)要求設(shè)計(jì)加速試驗(yàn)，3個(gè)月就基本可以預(yù)知產(chǎn)品的有效期。根據(jù)長期留樣試驗(yàn)數(shù)據(jù)預(yù)測產(chǎn)品有效期時(shí)需與加速試驗(yàn)推算的結(jié)果進(jìn)行比較，如果6個(gè)月后長期試驗(yàn)結(jié)果與反應(yīng)動力學(xué)計(jì)算的主藥含量變化一致，則需繼續(xù)考察兩種方法的結(jié)果能否在產(chǎn)品的整個(gè)有效期內(nèi)一致。

6.4 因不同國家和地區(qū)的氣候條件不同，長期留樣試驗(yàn)條件的設(shè)定主要依據(jù)藥品注冊國家或地區(qū)的氣候條件，若藥品在上市或者的地域氣候差別較大，其穩(wěn)定性試驗(yàn)應(yīng)在盡可能多的國家和地區(qū)進(jìn)行。因?yàn)闇囟群蜐穸鹊淖兓瘜绊懰幤返挠行?，有試?yàn)顯示溫度升高2℃，產(chǎn)品的有效期將會縮短20%。

6.5 每個(gè)氣候區(qū)產(chǎn)品的有效期是根據(jù)相應(yīng)的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果確定的。雖然每個(gè)氣候區(qū)的平均熱力學(xué)溫度在設(shè)定時(shí)已經(jīng)將該氣候區(qū)一年中可能存在的溫度波動考慮在內(nèi)，但因一些產(chǎn)品對短時(shí)間內(nèi)較高的溫度敏感，因此對這類產(chǎn)品要求明確存儲溫度的上限。

下面是美國FDA頒布的標(biāo)準(zhǔn)，可在確定藥品有效期貯藏條件時(shí)參考：必須在＋25℃以下保存；必須在＋20℃以下保存；必須在＋8℃以下保存；必須在＋8℃以上保存；必須在干燥處保存；必須避光保存。特殊情況下也會使用以下標(biāo)準(zhǔn)：必須在＋30℃以下保存；必須在＋15℃以下保存。

6.6 在改變處方和生產(chǎn)工藝時(shí)，常常無法獲得2～3批樣品的穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)，此時(shí)研究者應(yīng)設(shè)法證明處方工藝改變前后產(chǎn)品的穩(wěn)定性沒有差異，則可以借鑒處方工藝改變前的穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)。如果處方工藝的改變可能會對產(chǎn)品的有效期產(chǎn)生影響，則應(yīng)對多批樣品進(jìn)行穩(wěn)定性研究，獲取較完整的穩(wěn)定性信息，以推算產(chǎn)品的有效期。

6.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)測試批次樣品未采用zui終產(chǎn)品的包裝，研究者可在現(xiàn)有包裝條件下穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，結(jié)合外在氣候條件可能產(chǎn)生的影響和zui終產(chǎn)品包裝的特性，推斷出產(chǎn)品的有效期。

但是，無論是改變處方工藝或是測試批次樣品未采用zui終產(chǎn)品包裝，研究者均應(yīng)對改變處方工藝后樣品和采用包裝樣品進(jìn)行長期留樣的穩(wěn)定性試驗(yàn)，以確定產(chǎn)品的實(shí)際有效期。

以上就新藥研發(fā)過程中不同研發(fā)階段不同規(guī)模樣品進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的和意義，以及不同規(guī)模樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果對確定或推算產(chǎn)品有效期的價(jià)值進(jìn)行了闡述，僅代表個(gè)人觀點(diǎn)，目的是與業(yè)內(nèi)人士探討新藥穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果分析和評價(jià)的思路，以及在現(xiàn)有注冊申報(bào)情況下對有限的穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行合理的分析，預(yù)測藥品的有效期，為后續(xù)階段的研發(fā)工作提供藥品穩(wěn)定期限的。

但是，根據(jù)穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用反應(yīng)動力學(xué)方法推算產(chǎn)品的有效期，通常為藥品注冊申報(bào)時(shí)有效期的確定提供參考；通過對樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，推算產(chǎn)品的穩(wěn)定期限，其結(jié)果只是預(yù)測值，并不代表產(chǎn)品實(shí)際的有效期，研究者仍需對上市產(chǎn)品繼續(xù)進(jìn)行長期留樣的穩(wěn)定性研究，以驗(yàn)證并確定產(chǎn)品實(shí)際的有效期。